Excretion-secretion products and proteases from live Sporothrix schenckii yeast phase: immunological detection and cleavage of human IgG / Produtos da excreção-secreção e proteases da fase leveduriforme do Sporothrix schenckii: detecção imunológica e clivagem de IgG humana

Antigenic preparations from Sporothrix schenckii usually involve materials from mixed cultures of yeast and mycelia presenting cross-reactions with other deep mycoses. We have standardized pure yeast phase with high viability of the cells suitable to obtain specific excretion-secretion products without somatic contaminations. These excretion-secretion products were highly immunogenic and did not produce noticeable cross-reactions in either double immunodiffusion or Western blot. The antigenic preparation consists mainly of proteins with molecular weights between 40 and 70 kDa, some of them with proteolytic activity in mild acidic conditions. We also observed cathepsin-like activity at two days of culture and chymotrypsin-like activity at four days of culture consistent with the change in concentration of different secreted proteins. The proteases were able to cleave different subclasses of human IgG suggesting a sequential production of antigens and molecules that could interact and interfere with the immune response of the host.

As preparações antigênicas de Sporothrix schenckii provêm geralmente de cultivos mistos de leveduras e micélios e apresentam reações cruzadas com outras micoses profundas. Foi padronizada a obtenção da fase leveduriforme pura, com alto índice de células viáveis, o que permite, por sua vez, obter produtos específicos da excreção-secreção sem contaminantes somáticos. Estes produtos da excreção-secreção são altamente imunogênicos, e não apresentam reações cruzadas visíveis em dupla difusão e sem Western blot. O preparado antigênico consiste principalmente em proteínas com peso molecular entre 40 e 70 kDa, sendo que algumas apresentam atividade proteolítica em meios levemente ácidos. Foi observada atividade do tipo catepsina em produtos da excreção-secreção obtidos a partir de leveduras de dois dias de cultivo, e atividade do tipo quimiotripsina aos quatro dias de cultivo, consistente com a mudança de concentração de proteínas secretadas. As proteases puderam clivar diferentes subclasses de IgG humanas, o que sugere uma produção seqüencial de antígenos e moléculas que podem interagir com a resposta imune do hospedeiro.

Synthesis and contents of pancreatic exportable enzymes: effect of oleic acid intraduodenal administration

Ratas Sprague-Dawley fueron estimuladas intraduadernalmente con ácido oleico y sacrificadas 20, 40, 60 y 80 m luego de la instilación. En todos los grupos se administró, 10m antes del sacrifício, 50 uCi de 3H-fenilalanina (3H-F) intraperitoneal. Se cuantificaron los niveles intrapancreáticos de Am, Chtg, Tg y Li y la incorporación de 3H-F en las proteínas secretoras. A los 40 m de la administración de ácido oleico se registró la máxima estimulación de ácido oleico se registró la máxima estimulación para Chtg (45%), Tg (38%) y Li (23%) por sobre los valores controles, no modificándose la Am. Todos los valores enzimáticos cayeron por debajo de los controles a los 60 y 80 minutos. La incorporación 3H-F fue máxima a los 40 m decayendo a tiempos más prolongados. En el presente trabajo demostramos que la administración intraduodenal de ácido oleico genera un aumento no paralelo en el nivel intrapancreático de algunas enzimas exportables, y que dichos valores caen a partir de los 40 m post-instilación, siendo la síntesis proteica afectada de manera similar